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——生物安全柜的試驗(yàn)方法

更新時(shí)間:2014-06-10      點(diǎn)擊次數(shù):3258

  生物潔凈安全柜是當(dāng)今微生物實(shí)驗(yàn)室之必要品,特別是那些對(duì)操作者需要采取保護(hù)措施的場(chǎng)合。如醫(yī)療、制藥、科研等進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)既無菌無塵又工作安全的環(huán)境。為了讓更多用戶更加充分的了解該產(chǎn)品,接下來為您解析生物安全柜的試驗(yàn)方法。

  1、一般要求

  1.1 試驗(yàn)條件

  “被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下”指:生物安全柜工作于說明書所規(guī)定的條件下。

  1.2 試驗(yàn)順序

  應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)6.3條規(guī)定的順序進(jìn)行試驗(yàn)。

  1.3 試驗(yàn)環(huán)境

  生物安全柜的性能試驗(yàn)應(yīng)在符合下列環(huán)境要求的門口帶正壓緩沖室的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行:

  a) 溫度: 15~30 ℃;

  b) 相對(duì)濕度:不高于70 %;

  c) 潔凈度:在自凈狀態(tài)下可以達(dá)到5級(jí)。

  1.4供電電源

  1.4.1 電源電壓偏差:±3V;

  1.4.2 電源頻率偏差:±2Hz。

  2、試驗(yàn)儀器

  2.1 試驗(yàn)儀器應(yīng)定期送至具有檢定(檢驗(yàn)、校準(zhǔn))資格的計(jì)量測(cè)試機(jī)構(gòu)進(jìn)行測(cè)試,有效使用周期長(zhǎng)不得過一年。試驗(yàn)儀器檢定并校正合格后才可投入使用。

  2.2 生物安全柜的試驗(yàn)需要以下儀器:

  a)氣溶膠發(fā)生器

  b) 粒子計(jì)數(shù)器(粒徑分辨率由0.3μm或0.1μm起始);

  c) 噴霧效率≥88 %的噴霧器,符合本標(biāo)準(zhǔn)附錄A的要求;

  d) 外徑為63mm的兩端閉合的模擬干擾圓筒(簡(jiǎn)稱圓筒),長(zhǎng)度由生物安全柜的內(nèi)部尺寸決定,材質(zhì)為不銹鋼或鋁;

  f) 撞擊采樣器(毛細(xì)管直徑為1.0mm,采樣量為12.5l/min);

  g) 縫隙采樣器(采樣量為30l/min);

  f) Φ90培養(yǎng)皿,培養(yǎng)基中應(yīng)含有營養(yǎng)瓊脂、大豆瓊脂或其他適合微生物生長(zhǎng)的不含抑制劑或添加劑的介質(zhì);

  g) 熱球式風(fēng)速儀或風(fēng)量測(cè)試儀,測(cè)量精度為±0.01m/s;

  h) 微壓計(jì),精度等級(jí)不低于1.5級(jí);

  i) 干球溫度計(jì),小單位分格為1℃;

  j) 聲級(jí)計(jì),測(cè)量范圍為50~100dB,“A”計(jì)權(quán)模式;

  k) 照度計(jì),能滿足1000lx以下照度的測(cè)量;

  l) 振動(dòng)儀,小靈敏度達(dá)到2.5μm振幅有效值;

  m) 接觸電流檢測(cè)儀;

  n) 微電阻測(cè)試儀;

  o) 耐壓測(cè)試儀,輸出交流有效值1500V,或直流2121V電壓,且持續(xù)時(shí)間能在1~60s范圍內(nèi)設(shè)定。

  3、試驗(yàn)方法

  3.1箱體檢漏

  卸去被測(cè)生物安全柜的部分護(hù)板或裝飾板,暴露箱體,并將生物安全柜箱體形成一個(gè)獨(dú)立閉合系統(tǒng)。

  將箱體加壓至500Pa,連續(xù)維持該狀態(tài)。在箱體的焊縫、墊片、貫穿部分及密封處噴涂25g/L肥皂液,以找出泄漏點(diǎn)。

  備注:可用中性洗滌劑稀釋10倍當(dāng)肥皂液使用。

  3.2 過濾器檢漏

  3.2.1 排風(fēng)過濾器檢漏

  排風(fēng)過濾器檢漏在下述方法中任選一種:

  a) 只開排風(fēng)機(jī),不開送風(fēng)機(jī),使生物安全柜吸入普通環(huán)境空氣,含塵濃度不低于10000粒/L(≥0.5μm)。用粒子計(jì)數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面和邊框縫隙處之上20mm處,做掃描檢漏,掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s,路線應(yīng)重疊。

  b) 通過氣溶膠發(fā)生器在排風(fēng)過濾器的上游,通過有螺紋插塞的貫穿物向被測(cè)生物安全柜的遠(yuǎn)離過濾器的靜壓箱內(nèi)導(dǎo)入氣溶膠,并在上游臨近過濾器處測(cè)量氣溶膠濃度,測(cè)點(diǎn)少為3點(diǎn),分別為中心1點(diǎn),距兩邊50mm處各一點(diǎn)。用粒子計(jì)數(shù)器的采樣口在排風(fēng)過濾器出風(fēng)面之上20mm處,做掃描檢漏,掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s,路線應(yīng)重疊。

  如果檢漏標(biāo)準(zhǔn)是以0.1μm來評(píng)價(jià),只適用方法b)。

  檢測(cè)到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項(xiàng)的規(guī)定。

  3.2.2 送風(fēng)過濾器檢漏

  環(huán)境含塵濃度≥10000粒/L(≥0.5μm),在送風(fēng)面以下20mm處,作掃描檢漏,掃描移動(dòng)速度≤5~20mm/s,路線應(yīng)重疊。

  檢測(cè)到的粒子數(shù)應(yīng)符合表4中第2項(xiàng)的規(guī)定。

  3.3潔凈度

  被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下運(yùn)行30min。

  潔凈度的測(cè)量邊界距離內(nèi)表面或前窗150mm。

  粒子計(jì)數(shù)器的采樣口置于工作臺(tái)面向上200mm高度位置,測(cè)量點(diǎn)按圖1布置。

  潔凈度應(yīng)符合表4中第3項(xiàng)的規(guī)定。

  3.4人員安全性

  3.4.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖2):

  a) 把含有55ml枯草芽孢菌懸液(5 ~ 8×108/ml)的噴霧器置于安全柜左右內(nèi)壁的水平中心,其水平噴射軸應(yīng)在工作臺(tái)面向上350mm處,且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗內(nèi)側(cè)100mm處并朝向前窗。

  b) 圓筒置于安全柜中央,且中心軸位于工作臺(tái)面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁,另一端應(yīng)伸出安全柜前窗至少150mm。

  c) 圓筒周圍設(shè)四個(gè)撞擊采樣器,它們的采樣口設(shè)置在安全柜前窗向外63mm處。其中兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔150mm,且與圓筒頂部水平線相切。另兩個(gè)撞擊采樣器的采樣口的軸心線相隔50mm,且與圓筒底部水平線在一個(gè)水平面上。另設(shè)置兩個(gè)撞擊采樣器,其采樣口所在的水平面位于工作臺(tái)面向上360mm處,兩個(gè)采樣口的豎軸在安全柜前窗向外50mm處,并分別位于安全柜中心線兩邊各150mm處。

  d) 設(shè)置兩個(gè)縫隙采樣器,其采樣口所在的水平面即為工作面,垂直軸線距安全柜前端外壁面150mm,且距兩邊內(nèi)壁面均為200mm處。

  e) 作為陽性對(duì)照,一個(gè)有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方,且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm,使其對(duì)進(jìn)入隔柵的氣流干擾小。

  3.4.2 采樣程序

  緩沖室正常運(yùn)行,自凈系統(tǒng)開啟,直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后,停止自凈系統(tǒng),生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

  試驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間為30min,采樣程序見表5:

  表5  采樣程序

  3.4.3細(xì)菌培養(yǎng)

  采用一個(gè)直徑為47mm,孔徑為0.22μm的薄膜濾片過濾所有的撞擊采樣器采樣液體。在無菌狀態(tài)下,卸下濾片并置于有合適介質(zhì)的培養(yǎng)皿中。盛有濾片的培養(yǎng)皿、兩個(gè)縫隙采樣器的培養(yǎng)皿和對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性,則重新培養(yǎng),并在44~48h后讀數(shù)。

  對(duì)照培養(yǎng)皿應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落,稱其為陽性。

  應(yīng)按6.3.4.2和6.3.4.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

  6.3.4.4 對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.4.2和6.3.4.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn):

  a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

  b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

  3.4.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)的各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

  3.5 受試樣本安全性

  3.5.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖3,圖4):

  a) 含有55ml芽孢菌懸液(5 ~ 8×106/ml)的噴霧器置于安全柜的水平中心,其水平噴射軸應(yīng)在工作臺(tái)面向上200mm處,且平行于工作面。噴霧器的噴嘴應(yīng)置于距前窗外側(cè)100mm處,并朝向前窗。

  b) 圓筒置于安全柜中央,且中心軸位于工作臺(tái)面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁,另一端應(yīng)伸出安全柜前窗至少150mm。

  c)在工作臺(tái)面上滿布瓊脂培養(yǎng)皿,然后依次打開培養(yǎng)皿蓋子。

  d) 作為陽性對(duì)照,一個(gè)有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方,且位于前窗進(jìn)風(fēng)隔柵上方或下方10mm,使其對(duì)進(jìn)入隔柵的氣流干擾小。

  3.5.2 采樣程序

  緩沖室正常運(yùn)行,自凈系統(tǒng)開啟,直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后,停止自凈系統(tǒng),生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

  噴霧器運(yùn)行5分鐘。噴霧器停止5分鐘后,為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。

  3.5.3細(xì)菌培養(yǎng)

  培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性,則重新培養(yǎng),并在44~48h后讀數(shù)。

  對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落,稱其為陽性。

  應(yīng)按6.3.5.2和6.3.5.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

  3.5.4對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.5.2和6.3.5.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn):

  a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

  b) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

  3.5.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

  3.6 交叉感染

  3.6.1儀器及采樣點(diǎn)布置(圖5):

  a) 含有55ml枯草芽孢菌懸液(5 ~ 8×104/ml)的噴霧器,其水平噴射軸位于工作臺(tái)面向上76~127mm處,且平行于工作面。噴霧器的背面緊靠左(右)內(nèi)壁的氣流分界面,噴嘴正對(duì)右(左)內(nèi)壁。

  b) 瓊脂培養(yǎng)皿按以下方法布置:

  位于噴霧器噴嘴的下方設(shè)置兩個(gè)對(duì)照培養(yǎng)皿,距右(左)內(nèi)壁360mm處布置一列培養(yǎng)皿,在緊靠上述培養(yǎng)皿右(左)側(cè)再布置一列到兩列培養(yǎng)皿。

  3.6.2 采樣程序

  緩沖室正常運(yùn)行,自凈系統(tǒng)開啟,直至環(huán)境潔凈度達(dá)到5級(jí)后,停止自凈系統(tǒng),生物安全柜運(yùn)行30min后開始試驗(yàn)。

  噴霧器運(yùn)行5分鐘。噴霧器停止15分鐘后,為瓊脂培養(yǎng)皿上蓋。

  3.6.3細(xì)菌培養(yǎng)

  培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)。若培養(yǎng)皿為陰性,則重新培養(yǎng),并在44~48h后讀數(shù)。

  對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃下培養(yǎng)24~28h后檢測(cè)應(yīng)是陽性。當(dāng)對(duì)照培養(yǎng)皿內(nèi)含有≥300個(gè)枯草桿菌的菌落,稱其為陽性。

  應(yīng)按3.6.2和3.6.3的程序進(jìn)行三次試驗(yàn)。

  3.6.4對(duì)于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計(jì)的生物安全柜在下述條件下按6.3.6.2和6.3.6.3的程序分別重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn):

  a) 吸入口風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.015m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速+0.05±0.015m/s;

  b) 離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s,送風(fēng)風(fēng)速偏離標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速–0.05±0.01m/s。

  3.6.5 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)環(huán)境內(nèi)各個(gè)表面進(jìn)行擦拭消毒。

  3.7 送風(fēng)風(fēng)速

  在距離內(nèi)側(cè)壁板及前窗100mm圍成的,在工作臺(tái)面上方300mm處的平面區(qū)域內(nèi)測(cè)量垂直氣流的平均風(fēng)速。

  測(cè)量點(diǎn)服從行、列均為150m m的網(wǎng)格分布。若去除測(cè)量邊界后凈尺寸不等于15的整數(shù)倍,則允許修正測(cè)量點(diǎn)距離,但每列至少測(cè)量3點(diǎn),每行至少測(cè)量7點(diǎn)。

  送風(fēng)風(fēng)速為各測(cè)量點(diǎn)讀數(shù)的算術(shù)平均值。

  送風(fēng)風(fēng)速應(yīng)符合表4中第7項(xiàng)的規(guī)定。

  3.8 工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速

  3.8.1 對(duì)I級(jí)和II級(jí)生物安全柜進(jìn)行工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速試驗(yàn)。試驗(yàn)步驟如下:

  a) 對(duì)試驗(yàn)環(huán)境停止送風(fēng)。

  b) 測(cè)量排風(fēng)口速度

  用套管和排風(fēng)口法蘭連接,套管長(zhǎng)度等于排風(fēng)口長(zhǎng)邊的2倍。將套管截面均分為約100mm×100mm的方塊,每一塊中心為一個(gè)測(cè)點(diǎn),測(cè)點(diǎn)總數(shù)不少于6個(gè)。在套管中部垂直兩邊正對(duì)每一列方塊中心打孔,風(fēng)速儀測(cè)桿伸入孔中測(cè)量。

  c) 求出排風(fēng)量

  以套管截面平均風(fēng)速乘以套管截面積即得排風(fēng)量(m3/s)。

  d) 測(cè)量送風(fēng)面速度

  在送風(fēng)散流板垂直向下150mm,距邊墻50mm圍成的平面區(qū)域內(nèi)測(cè)量送風(fēng)風(fēng)速。該平面的測(cè)量點(diǎn)服從行、列約為100mm的網(wǎng)格分布。測(cè)點(diǎn)總數(shù)不少于6個(gè)。

  e) 求出送風(fēng)量

  以送風(fēng)面平均風(fēng)速乘以送風(fēng)面面積即得送風(fēng)量(m3/s)。

  f) 排風(fēng)量(m3/s)與送風(fēng)量(m3/s)的差值即為計(jì)算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量(m3/s)。

  g) 計(jì)算得到的工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量(m3/s)與前窗開口面面積(m2)的商,即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速(m/s),該數(shù)值應(yīng)符合表4中第8項(xiàng)的規(guī)定。

  3.8.2 Ⅲ級(jí)生物安全柜手套入口的風(fēng)速測(cè)定,試驗(yàn)步驟如下:

  開啟生物安全柜。把風(fēng)速儀放在手套入口的中心處,并記錄測(cè)量的風(fēng)速,測(cè)量時(shí)間少為1分鐘。另一只手套入口的中心處用風(fēng)速儀進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。

  3.9 壓差

  被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下,柜上微壓差計(jì)或用規(guī)定微壓差計(jì)測(cè)出柜內(nèi)外壓差。

  3.10溫升

  被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下連續(xù)運(yùn)行4h。

  將一個(gè)干球溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜前窗開口面中心向外80mm處測(cè)量環(huán)境溫度,另一個(gè)干球溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜工作臺(tái)面的幾何中心向上300mm處測(cè)量操作區(qū)溫度。

  當(dāng)溫度計(jì)上的數(shù)值達(dá)到穩(wěn)態(tài)后,兩個(gè)溫度計(jì)的差值應(yīng)符合表4中第10項(xiàng)的規(guī)定。

  3.11 噪聲

  對(duì)試驗(yàn)環(huán)境停止送風(fēng)。

  聲級(jí)計(jì)置于“A”計(jì)權(quán)模式。

  在被測(cè)生物安全柜前壁面中心水平向外300mm,高度距地面1100mm處測(cè)量。

  噪聲讀數(shù)按表6修正。

  表6 噪聲讀數(shù)修正

  處理得到的數(shù)值應(yīng)符合表4中第11項(xiàng)的要求。

  3.12 照度

  在工作臺(tái)面上,沿工作臺(tái)面內(nèi)壁面水平中心線每隔300mm設(shè)置一個(gè)測(cè)量點(diǎn)。與邊墻距離<150mm時(shí),不再設(shè)置。

  被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件下,重復(fù)各測(cè)量點(diǎn)檢測(cè)。被測(cè)生物安全柜照度為各測(cè)量點(diǎn)照度的算術(shù)平均值,并應(yīng)符合表4中第12項(xiàng)的要求。

  3.13 振動(dòng)幅值

  被測(cè)生物安全柜置于正常工作條件。

  將振動(dòng)儀的振動(dòng)傳感器牢固地固定在工作臺(tái)面的中心,測(cè)量生物安全柜工作時(shí)的總振幅。

  工作臺(tái)面的振動(dòng)幅值應(yīng)符合表4中第13項(xiàng)的規(guī)定。

  3.14 工作臺(tái)面抗變形

  將面積為250mm×250mm、重量為23kg的測(cè)試負(fù)載均勻地施加于被測(cè)生物安全柜臺(tái)面中央,在載重條件下測(cè)量安全柜臺(tái)面前部邊緣中心至地面的距離。

  負(fù)載及空載條件下安全柜臺(tái)面前部邊緣中心至地板的變化距離應(yīng)小于5mm。

  3.15 接觸電流

  按GB/T12113 接觸電流和保護(hù)導(dǎo)體電流的測(cè)量方法進(jìn)行試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合表4

  中第15項(xiàng)的規(guī)定。

  3.16 接地電阻

  被測(cè)生物安全柜所有的功能開關(guān)均置于“斷”位,用微電阻測(cè)試儀測(cè)量電源插頭“地”插銷與可觸及件之間的電阻,電阻值應(yīng)符合表4中第16項(xiàng)的規(guī)定。

  3.17 耐電壓

  被測(cè)生物安全柜電源輸入端各插銷與箱體接地端之間應(yīng)能承受50Hz正弦電壓1500V有效值工頻電壓持續(xù)1min,應(yīng)無擊穿和閃絡(luò)現(xiàn)象。

  3.18氣流流向

  3.18.1 工作區(qū)內(nèi)氣流

  在Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)生物安全柜的工作區(qū)域離開口處約50mm的整個(gè)截面上發(fā)可視性煙霧,觀察煙霧,應(yīng)符合表4中第18項(xiàng)規(guī)定。

  3.18.2 吸入口氣流

  在Ⅱ級(jí)生物安全柜外離開口處約100mm的整個(gè)截面上發(fā)可視性煙霧,觀察煙霧,應(yīng)符合表4中第18項(xiàng)規(guī)定。

 

 

  凈化設(shè)備有限公司位于浙江省紹興市上虞區(qū)道墟鎮(zhèn),,是華東地區(qū)凈化設(shè)備行業(yè)中的制造商之??砂碔SO14644-1標(biāo)準(zhǔn)、GB50073-2001國家標(biāo)準(zhǔn)及國家GMP規(guī)范要求為微電子、生物醫(yī)藥、醫(yī)院手術(shù)室、光纖光纜、食品飲料、精密儀器、半導(dǎo)體及新材料應(yīng)用等行業(yè)的空氣凈化系統(tǒng)工程設(shè)計(jì)、施工、檢測(cè)及技術(shù)服務(wù)。

  公司主營凈化工作臺(tái)系列、風(fēng)淋室系列、通風(fēng)柜系列,生物安全柜系列被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、電子、制藥、生物、食品、農(nóng)林、畜牧獸醫(yī)、檢驗(yàn)檢疫、航空航天、汽車制造、精密儀器、大專院校和各科研機(jī)構(gòu),在和東南亞市場(chǎng)享有高的聲譽(yù)。

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